紫苏子有效成分的提取分离毕业论文.doc

1、本科学生毕业论文论文题目：紫苏子有效成分的提取分离学 院：化学化工与材料学院年 级：专 业：姓 名：学 号：指导教师： 2014 年5月15日word文档 可自由复制编辑摘要紫苏子，唇形科植物紫苏的干燥成熟果实（Perilla frutescens var. acuta）是我国传统中药，属于辛温解表药。主产于湖北、江苏、湖南、浙江、安徽等地。主要成分为脂肪油、生物碱类、糖类、黄酮类等成分，有降气消痰、平喘、润肠之功能。临床上有降血脂、止咳平喘、抗过敏、抗衰老等药理作用。因此其有效成分的提取分离对于紫苏子应用于临床具有重要意义。本文应用回流提取法对紫苏子有效成分进行提取，提取物主要是脂肪油、黄酮

2、类化合物、多酚类化合物等。然后分别应用硅胶柱色谱分离方法、葡聚糖凝胶柱色谱分离方法对其有效成分进行分离。分离物做薄层分析并查阅文献可知得到咖啡酸、迷迭香酸、木犀草素、芹菜素等成分。关键词紫苏子；回流提取法； 硅胶柱色谱；葡聚糖凝胶柱色谱；有效成分 AbstractPerilla frutescens is the dry and riped fruit of perilla which belongs to labiatae plants. As a kind of traditional Chinese Medicine,it is belongs to the Xinwen jiebiao

3、 drugs.The most agriculture of perilla are located in Hubei, Jiangsu, Hunan, Zhejiang, Anhui and other places.The main ingredients include fatty oil, flavonoids, alkaloids, sugar and other ingredients, with reducing gas sputum elimination, and asthma, runchang function. Perilla frutescens have conqu

4、er the blood grease, relieving cough and asthma, antianaphylaxis, anti-aging and other pharmacological effects on clitical. Therefore, the extraction and separation of effective ingredients is significance for Perilla applied to clinical. Using refluxing extraction to extract the effective component

5、s of Perilla in this artical, the main components of the extract is fatty oil, flavonoids, phenolic compounds and so on. Then using silica gel column chromatography, Sephadex LH-20 column chromatography respectively to separate the effective components. Then the TLC analysis was performed for the fu

6、rther research. Through consulting the literature we can know these substances is caffeic acid, rosmarinic acid, luteolin, apigenin and other components.Key words Perilla frutescens; Reflux extraction; Silica gel column chromatography; Sephadex LH-20 column chromatography; active principleword文档 可自由

7、复制编辑目录摘要IAbstractII前言1第一章 紫苏子1一、 紫苏子的形态特征2二、 生长习性2三、 地理分布2第二章 紫苏子的研究2一、 化学成分的研究2（一） 脂肪油2（二） 氨基酸3（三） 黄酮类和多酚类化合物3（四） 微量元素、矿质元素4（五） 其它4二、 药理活性的研究4（一） 降血脂4（二） 促进学习记忆能力5（三） 止咳、平喘作用5（四） 抗衰老作用5（五） 抗过敏作用6（六） 其它作用6第三章 紫苏子有效成分的提取6一、 溶剂提取法7二、 溶剂提取法的原理7三、 提取实验8（一） 回流提取法8（二） 实验操作过程8四、 其他几种溶剂提取法9（一） 浸渍法9（二） 渗漉法9（

8、三） 煎煮法10（四） 连续回流提取法10（五） 超临界流体萃取技术10（六） 超声波提取技术10五、 溶剂提取法的溶剂11（一） 水11（二） 亲水性有机溶剂11（三） 亲脂性有机溶剂12第四章 紫苏子有效成分的分离12一、 柱色谱法旳一般技术12（一） 色谱柱12（二） 色谱材料的准备12（三） 装柱13（四） 加样13（五） 洗脱13二、 硅胶柱色谱法13（一） 原理13（二） 流动相14（三） 惯用方法14（四） 实验操作过程14三、 葡聚糖凝胶柱色谱15（一） 原理15（二） 葡聚糖凝胶柱的使用方法15（三） 实验操作过程16第五章 紫苏子的有效成分17一、 提取过程得到的成分17（

9、一） 脂肪油17（二） 黄酮类化合物18二、 分离过程得到的成分19（一） 咖啡酸19（二） 迷迭香酸19（三） 木犀草素20（四） 芹菜素20结论22参考文献23致谢25word文档 可自由复制编辑前言现如今人们的环保意识越来越强，对于医药的标准要求更是严格。中药作为中国华民族的传统特色，不论是在古代还是现代，它在人们生活中的应用都非常广泛。由于中药具有种类繁多、活性多样、易于降解、毒性较小、与环境相容等优点，它的应用在全世界范围内都有一定的影响。尤其是以天然源活性成分为先导化合物开发活性更优的绿色新药，已成为新药研发的重要方向。我们通过文献调研选取中药中具有代表性的紫苏子进行有效成分的提取

10、分离研究，为进一步开发利用这种资源提供一定的理论基础。紫苏子为唇形科植物紫苏（Perilla frutescensL Britt.）的干燥成熟果实，有降气消痰，平喘，润肠之功效，临床用于痰壅气逆，咳嗽气喘，肠燥便秘。紫苏植物分布遍及我国各地, 许多省已进行大面积种植。 其根、茎、叶、果实以往仅供药用。随着科学的发展,紫苏在医药工业、食品工业、化妆品工业、饲料工业等方面综合利用的经济价值已逐渐为人们所认识, 科学发达国家在这方面做了大量的研究1 蔡红梅, 宋宁.紫苏子油理化特性及脂肪酸组成的研究J.青海科技,2002,23(4):48-49.。江西是紫苏子产地之一、且含油量高,但目前大多是野生,

11、因此,我们有必要重新认识和充分重视这一重要植物资源, 并花费一定的时间和精力去做好它的研究,种植工作。虽然有许多紫苏子研究的相关文献，但对于紫苏子的提取分离技术及相关的提取分离后的活性成分的研究较少涉及。本文不但介绍了紫苏子的提取分离技术，而且对其提取分离后的活性成分也进行了相关介绍，这紫苏子在药用领域发挥作用具有重要作用。第一章 紫苏子紫苏子为唇形科植物紫苏（Perilla frutescensL Britt.）的干燥成熟果实，有降气消痰平喘，润肠之功效，临床用于痰壅气逆，咳嗽气喘，肠燥便秘。紫苏植物分布遍及我国各地,许多省已进行大面积种植。其根、茎 、叶、果实以往仅供药用。随着科学的发展,

12、紫苏在医药工业、食品工业、化妆品工业、饲料工业等方面综合利用的经济价值已逐渐为人们所认识,科学发达国家在这方面做了大量的研究。江西是紫苏子产地之一、 且含油量高,但目前大多是野生,因此,我们有必要重新认识和充分重视这一重要植物资源,并花费一定的时间和精力去做好它的研究种植工作。一、 紫苏子的形态特征紫苏子是具有特殊芳香的草本植物，植株茎呈直立形态，分支较多，外观颜色呈绿色或绿紫色。紫苏子植物的叶呈卵形，边缘有锯齿。其干燥的果实呈卵圆形或圆球形。野生的紫苏子干燥颗粒粒比较小，栽培的紫苏子干燥颗粒粒比较大。干燥颗粒表面成灰褐色至暗棕色或黄棕色，有隆起的网状花纹，颗粒较尖的一端可以看见果柄。干燥颗粒

13、的果皮较薄，硬而脆，轻压即碎。种仁呈黄白色，富含油质2 王永奇, 赵宇峰, 李曼杰等.紫苏的研究:紫苏子的化学成分研究J.长白山中医药研究与开发,1993,2(4):28-29.。气味清香，味道有点苦涩。实验选材时选择颗粒饱满、均匀、灰棕色、没有杂质的干燥颗粒。二、 生长习性紫苏常生长在温暖湿润的地方。种子在地表温度为5以上时即可萌发，在1823的温度下是其适宜发芽的温度。在发苗期可以承受12的低温。紫苏子的植株在低温度下生长比较缓慢，在夏季生长最旺盛。在2228时是它开花期的适宜温度，相对湿度75%80%。紫苏子植株对抗湿，涝的性能较强，不能承受干旱，在产品器官形成时期，如空气比较干燥，紫苏

14、子成品的茎叶会粗硬、纤维会曾多、品质比较差。总的来说，紫苏子对土壤的适应性较强，在比较阴暗的地方也能生长。三、 地理分布紫苏最初生长在中国。由于应用比较广泛，现如今在印度、缅甸、日本、朝鲜、韩国、印度尼西亚和俄罗斯等国家均有种植。我国的紫苏子在华北、华中、华南、西南及台湾省均有野生种和栽培种。第二章 紫苏子的研究一、 化学成分的研究（一） 脂肪油紫苏子经石油醚提取后得到的主要成分是脂肪油，此脂肪油的成分中含有大量人体所必需的脂肪酸：-亚麻酸、亚油酸和油酸等多烯不饱和脂肪酸。采用GC-MS法对脂肪酸的组成进行鉴定,研究检出紫苏子油含有的脂肪酸共有六种，主要成分是：-亚麻酸、亚油酸、油酸，经查阅文

15、献可知还含有花生四烯酸、花生酸3 谭亚芳, 赖炳森, 颜晓林等.紫苏子油中脂肪酸组成的分析J.中国药学杂志,1998,33(7):400-402.、二十碳烯酸、二十碳烷酸。其主要成分及含量如表所示：表2-1紫苏子油的脂肪酸组成(%) 成分亚麻酸亚油酸油酸棕榈酸花生酸硬脂酸 含量 62.90 10.2019.204.211.611.01（二） 氨基酸紫苏子约含有18种氨基酸，其中动物必需氨基酸含量较高。例如，赖氨酸、含硫氨基酸4 王映强, 赖炳森, 路萍等.GC/MS分析紫苏子与亚麻子脂肪酸成分J.中国生化杂志,1999,20(2):62-64. 等。这十八种氨基酸分别为：天门冬氨酸、苏氨酸、丝

16、氨酸、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、色氨酸。各主要成分及含量如表所示：表2-2 紫苏子的氨基酸含量(W/%)氨基酸含量氨基酸含量氨基酸含量天门冬氨酸1.964丙氨酸0.994络氨酸0.775苏氨酸0.771胱氨酸0.392苯丙氨酸1.229丝氨酸1.139缬氨酸1.0905赖氨酸1.039谷氨酸4.531甲硫氨酸0.511组氨酸0.518甘氨酸0.922异亮氨酸0.830精氨酸0.271脯氨酸1.042亮氨酸1.563色氨酸2.548（三） 黄酮类和多酚类化合物紫苏子的醇提取物所得到的成分主要是黄酮和多酚类

17、化合物，且结果表示两者含量较丰富5 彭小玉, 邓焕彩.紫苏子化学成分初探J.江西医学院学报,1997,37(4):205-106.。紫苏子中黄酮和多酚类化合物的主要成分为咖啡酸、迷迭香酸、儿茶素、槲皮素、黄酮醇等6 张卫明, 刘月秀, 王红.紫苏子的化学成分研究J.中国野生植物资源,1998,17(1):42-44.7 王天元. 紫苏子皮提取物中抗氧化性成分及作用研究J.林产化学与工业,2002,22(1):63-67.。杨晓静等8 杨晓静, 王立众, 李和.紫苏子油不皂化物的分离与分析J.中国油料作物学报,2006,28(2):207-209.采用气相色谱法和快速硅胶柱色谱法对紫苏油中甾醇、

18、4-甲基甾醇和三甾醇等不皂化物的成分进行分离和分析，同时采用气相色谱-质谱联用确定了7种甾醇类化合物，分别为菜油甾醇(Campesterol)、胆甾醇(Cholesterol)、豆甾醇(Stigmasterol)、-波菜甾醇(-Spinasterol)、-谷甾醇(-Sitosterol)。 （四） 微量元素、矿质元素检测发现紫苏子中含有铁、锌、铜、钾、钙、镁、钠、磷、猛、砷、汞、钒、镍、硅、硼、铬、铅、铭等18种矿物质元素，还可分离得到谷维素、-胡萝卜素、抗过敏的多元酚、VB1、VB2、VE等。表2-3 紫苏子中的维生素、矿质元素含量(mg/kg)维生素含量元素含量元素含量元素含量VB23.8

19、P16497.0Al94.6Zn42.7VB1-Ca4030.0Na626.4Co0.5VC-K3990.0Mn60.5Cr1.1VE221.6Mg3019.0Cu28.7Pb0.5-胡萝卜素1.0Fe1360.0Ni2.1Hg-（五） 其它 从紫苏子中可以分离得到0.1-1%的谷维素、磷脂等9殷朝洲, 李保存, 朱来汀等.紫苏的开发与利用J.杭物杂志,1990,20(4):18-22.。二、 药理活性的研究（一） 降血脂紫苏子的脂肪油提取物具有明显的降血脂作用。陈氏等10 陈栋染, 刘莉, 黄刚.紫苏油及大豆肽合剂对大鼠血脂的调节作用J.临床心血管杂志,2003,19(1):30-32.研究

20、发现大豆肽和紫苏子油制成的制剂降脂肽可以显著降低高血脂模型大鼠的血清中TC及TG浓度，明显升高HDL-C水平，停止灌胃1周后,仍可使血清中TG维持在较低水平。谭氏等11 谭晓华, 叶丽明, 葛发欢.紫苏子油的超临界CO2萃取及药效学研究J.中药材,1999,22(10):520-523.报道紫苏子油对大鼠脂代谢紊乱有预防作用，对兔实验性高脂血症有改善作用。郭氏等12 郭英, 蔡香成, 李华娟.紫苏子油和松子油对大鼠机能脂类和脂质过氧化的影响J.营养学报,1996,18(3):268.的试验结果也表明紫苏子油对高脂血症大鼠均有一定的调整血脂的作用，且作用优于对照组。分析其作用机制，可能是紫苏子富

21、含-亚麻酸(十八碳三烯酸)是-3长链多烯长饱和脂肪酸-二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)的前体物质。在体内酶的作用下，-亚麻酸转变为EPA和DHA，后者通过抑制TC合成酶的限速酶羟甲基戊二酸单酰铺酶A还原酶的活性而减少体内TC的合成，同时-3脂肪酸能刺激TC代谢为胆酸和中性固醇而从粪便排除，从而降低血脂。（二） 促进学习记忆能力紫苏子中的脂肪油提取物具有促进小鼠的学习记忆能力的作用。文献报道从紫苏子提取有脂肪油，可减少小鼠跳台错误次数，能明显提高小鼠水迷路测验的正确百分率，缩短到达终点时间，并能促进小鼠脑内核酸及蛋白质的合成，调节小鼠脑内单胺类神经递质水平13 周丹, 韩大庆,

22、王永奇.紫苏子油对小鼠学习记忆能力的影响J.中草药,1994,25(5):251-252.。动物实验也证明，如果在食物中加入富含-亚麻酸饲料进行子鼠二代培养，可提高子代小鼠的学习记忆能力，使子代小鼠视网膜中的DHA增加，视网膜反射能增强14 徐章华, 邵玉芬.-亚麻酸对大鼠行为、视网膜及肝脑脂肪酸构成的影响J.中国公共卫生,2002,18(3): 301-303.。以上研究表明紫苏子促进学习记忆能力作用的机制可能是与其富含的-亚麻酸有关。（三） 止咳、平喘作用紫苏子提取的脂肪油有明显的止咳和平喘作用。王氏等15 王永奇, 王威.紫苏油抗过敏炎症的研究J.中草药,2001,32(1):83-85

23、.报道小鼠腹腔注射5gkg-1紫苏子油后，对喷雾组织胺和乙酰胆碱所致的支气管哮喘，能明显延长出现喘息性抽搐的潜伏期，与对照组比较有非常显著差异(P0.01),其作用与0.05gkg-1氦茶碱相似。小鼠灌服5gkg-1和2.5gkg-1紫苏子油后，咳嗽潜伏期显著延长，咳嗽次数显著减少，与对照组比较均有非常显著差异(P0.01)，其作用与0.01gkg-1咳必清相似。（四） 抗衰老作用现代医学认为，自由基是导致衰老的重要因素之一，其代谢产物之一MDA(过氧化产物)的含量可反映细胞被氧化程度，而SOD(过氧6化物歧化酶)通过对氧离子起歧化作用合成H2O2，再由其他抗氧化酶连续代谢变成水，清除自由基,

24、从而保护细胞不受毒性氧自由基的损害，而达到减缓衰老的作用。韩氏等16 王映强, 赖炳森, 颜晓林等.GC/MS分析紫苏子与亚麻子脂肪酸成分J.中国生化药物杂志,1999,20(2):62-64.报道紫苏油可明显降低脑及肝中MDA含量，对脑的作用优于肝，还可显著提高红细胞中SOD活力。因此认为紫苏油具有很好的抗衰老作用。（五） 抗过敏作用通过比较用紫苏子油组(富含亚麻酸)和红花油组(富含亚油酸)饲养的小鼠对抗原诱发的过敏性休克的死亡率，结果发现紫苏子油组比红花油组明显降低。紫苏子之所以具有抗过敏作用机理，是因为其所含有的-亚麻酸在体内代谢过程中,通过竞争酶系统，能抑制亚油酸向花生四烯酸(AA)转

25、化,降低体内AA水平。同时-亚麻酸转化的EPA和DHA，可直接抑制AA向二十碳物质(致敏物质)的代谢17 刘洪旭, 陈海滨, 吴春敏.紫苏子的研究进展J.海峡药学,2004,16(4):5-7.。（六） 其它作用还有文献报道从紫苏子中提取的紫苏子油具有抑制结肠癌、肾脏肿瘤的作用，其种皮具有防止油脂及其它食用物品氧化的作用18 武俊杰, 吾满江艾力, 刘力等.辐射对-亚麻酸氧化反应的影响J.中国科学院研究生院学报,2005,22(6):695-699.。 第三章 紫苏子有效成分的提取紫苏子属于中药产品， 中药所含的化学成份十分复杂，既含有多种有效成份，又有无效成份，也包含有毒成份。由此可知，其有

26、效成分的提取过程比较复杂。因此中药有效成分的提取技术成为中药研究领域中的一项重要内容。中药提取是应用一些可行的技术对其有效成分进行最大程度的提取，其提取过程使得中药制剂的内在质过程中非常重要的环节，提取的方法、流程、操作设备等都关系到中药能否发挥它的最大或最好治疗效果，这对于中药的临床应用十分重要。传统的提取方法例如，板框过滤法、离心法、树脂吸附法、醇沉法等工艺对中药提取液的澄清和提纯精制等操作存在较多问题。除此之外，过滤操作比较困难容易堵塞、树脂孔堵塞、溶剂消耗大、生产提取的废水量大、容易造成环保负担等问题。从中药材中提取活性成分的方法有溶剂法、水蒸气蒸馏法、及升华法等。由于水蒸气蒸馏法及升

27、华法的应用范围有限，所以常采用溶剂法对中药有效成分进行提取。溶剂提取法系根据药材的性质选择适当的溶剂将其中的化学成分从药材中提取出来。一般情况下，药材须经干燥并适当粉碎，这样有利于增大药材与溶剂的接触面积，提高萃取效率。紫苏子成分中脂肪油等油脂性化合物因为极性较小，易溶于氯仿、乙醚等亲脂性溶剂中，因此在进行提取实验时选择石油醚对其成分中的脂肪油进行提取；而糖苷、氨基酸等类成分则极性较大，易溶于水及含水醇中；酸性、碱性及两性化合物，存在状态随溶液PH的改变而改变，故溶解度也随PH的改变而改变。但是从药材中提取活性成分时，由于存在多种成分间的相互助溶作用，情况要复杂得多。因此，从药材中提取活性成分

28、很难有一个固定的模式。通常需根据提取要求、目的成分及杂质的性质差别以及溶剂的溶解能力来确定。一般，可将固体药材按提取用的溶剂的极性递增方式，用不同溶剂，如石油醚或汽油（可提出油脂、蜡、叶绿素、挥发油、游离甾体及三萜类化合物）、氯仿或乙酸乙酯（可提出游离生物碱、有机酸及黄酮、香豆素的苷元等中等极性化合物）、丙酮或乙醇、甲醇（可提出苷类、生物碱盐以及鞣质等极性化合物）及水（可提出氨基酸、糖类、无机盐等水溶性成分）依次进行提取。得到的各个部分经活性测试确定有效部位后再做进一步分离。本次试验主要从采用溶剂法提取中的回流提取法，下面依次介绍溶剂法提取的原理、回流提取法以及其他几种溶剂提取法。一、 溶剂提

29、取法溶剂提取法是中草药提取操作过程中应用最广泛的方法，主要是根据中草药中各种有效成分溶解度的差异，在提取过程中选用对所需成分的溶解度较大而对杂质溶解度较小的溶剂对药材有效成分进行提取。中草药经粉碎加入溶剂后，溶剂扩散并渗入到药材的细胞内，将可溶性物质进行溶解，从而细胞内外产生浓度差，细胞内的液体不断向外扩散，溶剂又不断进入药材组织细胞中，最终细胞内外溶液浓度达到动态平衡，溶液达到饱和。将饱和溶液过滤收集并加入新溶剂，从而把有效成分最大程度的提取出来。二、 溶剂提取法的原理溶剂法提取的原理是“相似者相溶”。提取过程是根据药材的性质选择合适的溶剂对其有效成分进行提取。化合物亲水性和亲脂性程度的大小

30、与其分子结构有关，一般来说，两种基本母核相同的成分，其分子中的官能团的极性越大或极性官能团数目越多，则整个分子的极性就越大，表现亲水性越强，而亲脂性越弱。其分子非极性部分越大或碳链越长，则极性越小，亲脂性越强，而亲水性越弱。紫苏子成分中脂肪油等油脂性化合物因为极性较小，易溶于氯仿、乙醚等亲脂性溶剂中，因此在进行提取实验时选择石油醚对其成分中的脂肪油进行提取；而糖苷、氨基酸等类成分则极性较大，易溶于水及含水醇中；酸性、碱性及两性化合物，存在状态随溶液PH的改变而改变，故溶解度也随PH的改变而改变。常见溶剂的极性强弱顺序可表示如下：石油醚（低沸点高沸点）二硫化碳四氯化碳三氯乙烯苯二氯甲烷氯仿乙醚乙

31、酸乙酯丙酮乙醇水吡啶乙酸。从药材中提取活性成分时，由于存在多种成分间的相互助溶作用，情况要复杂得多。因此，从药材中提取活性成分很难有一个固定的模式。三、 提取实验（一） 回流提取法回流提取法是用乙醇等易挥发的有机溶剂来将原料的的有效成分提取，提取过程中将浸出液加热蒸馏，则挥发性的有机溶剂会馏出，后又被冷却，重复此操作，直至有效成分被最大程度的回流提取的方法。 蒸馏过程时间较长，故此方法不适用于受热易遭破坏的原料成分的提取。有机溶剂加热提取时，应采用回流加热装置，以免溶剂挥发损失。如果是在实验室进行小量操作，可用连有回流冷凝管的圆底烧瓶。水浴加热，浸取溶剂一般浸过药材表面约12cm，一般在沸腾状

32、态下回流约1小时后放冷过滤，再在药渣中加入溶剂，进行第二次加热回流，重复此操作，每次约半小时，直到有效成分基本全部被提取出来为止。此法提取效率较冷浸法高，但只适用于小量生产，且受热易破坏的成分不宜用此法，且溶剂消耗量大，操作麻烦。（二） 实验操作过程提取：取200g紫苏子药材粉碎后用加入10倍量的石油醚（60-90）回流3次，每次2h,得到黄色透明溶液，合并，过滤，减压浓缩蒸发至干，得到黄色油状液体， g,(查文献)即石油醚提取物（主要成分为脂肪油）。将残渣晾干后，加入10倍量的75%乙醇，回流2次，每次2h, 得到深黄色溶液，合并每次所得溶液，过滤，减压浓缩至干，得浸膏11.5g，即紫苏子醇

33、提取物。（主要成分是黄酮）。表3-1 实验所用仪器与设备仪器名称生产厂家 RE-52型旋转蒸发器 上海亚荣生化仪器厂 FA2204B电子分析天平 上海精科公司 SHB-B95A循环水真空水泵 郑州长城科工贸有限公司 CLF-06C中药粉碎机 浙江温岭市创立药材器械厂 KQ-500DE型超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司 ZF-20D 暗式紫外分析仪 上海顾村电光仪器厂 海利AC0-9601静音水泵 中山市绿资园艺发展有限公司表3-2原料与试剂药品名称生产厂家95%乙醇(AR) 天津市富宇精细化工有限公司 石油醚(AR) 天津市富宇精细化工有限公司醋酸(AR) 天津市科密欧化学试剂有限公司葡聚

34、糖凝胶(Sephadex LH-20) 北京绿百草科技发展有限公司丙酮(AR) 天津市科密欧化学试剂有限公司正己烷(AR) 天津市科密欧化学试剂有限公司乙酸乙酯(AR) 天津市科密欧化学试剂有限公司甲苯(AR) 天津市科密欧化学试剂有限公司氯仿(AR) 天津市科密欧化学试剂有限公司甲酸(AR) 天津市科密欧化学试剂有限公司硫酸(AR) 天津市科密欧化学试剂有限公司硅胶 青岛海洋化工厂分厂硅胶板 青岛海洋化工厂分厂四、 其他几种溶剂提取法（一） 浸渍法是在常温或低热（80）条件下用适当的溶剂浸渍处理后的药材从而溶出其有效成分的方法。本法适用于有效成分遇热不稳定的或含大量淀粉、树胶、果胶、粘液质的

35、中药提取。实验简单易行，但浸出率较低，需要特别注意的是当水为溶剂时，提取液容易发霉变质，应加入适当的防腐剂。（二） 渗漉法渗漉法是在渗漉器中装入处理过的中药材，并向其中不断加入新鲜的浸出溶剂，使其不断渗过药材，将其有效成分不断浸出，浸出液随后从渗漉筒下端出口流出的方法。大量生产时常将收集的稀浸出液作为新原料的浸出溶剂。此法浸出效率较高，但该法消耗溶剂量大、费时长、操作比较麻烦。（三） 煎煮法煎煮法是在处理过的药材中加入水后加热煮沸，将其中的有效成分提取出来的方法。所用的容器一般为陶器、砂罐等，容器不可用铁器，这样煎煮过程会使药液变色。操作过程应控制好温度，温度过高会糊锅。此法操作简单，原料中大

36、部分成分可被不同程度地提出，但此法不适用于挥发性成分及有效成分遇热易破坏的中药，如果原料中含有多糖类，经煎煮操作后，药液比较粘稠，过滤比较困难。（四） 连续回流提取法连续回流提取法弥补了回流提取法中溶剂消耗量大，操作太繁琐的不足，实验室常用索氏提取器（脂肪提取器）来完成此操作。本法适用于用挥发性有机溶剂提取中药有效成分，且对于大型生产和小型生产对比较适用。溶剂消耗量少，提取较完全。但此法时间较长，对受热易分解的成分不宜用此法。 （五） 超临界流体萃取技术物质处于其临界温度(Tc)和临界压力(Pc)以上状态时，成为单一相态，将此单一相态成为超临界流体(superclitical ,SF).在超临

37、界状态下，将超临界流体与待分离的物质接触，通过控制不同的温度、压力以及不同种类及含量的夹带剂，使超临界流体有选择性的把极性大小、沸点高低和分子量大小的成分依次萃取出来。这种萃取方法称为超临界流体萃取法（SFE）。（六） 超声波提取技术超声波提取法是采用超声波辅助提取溶剂进行提取的方法。超声波是一种弹性机械振动波，其传播的振动频率在弹性介质中高达20kHz。超声波作用于液体介质引起介质的振动，当振动处于稀疏状态时，在介质中形成许多小空穴，这些小空穴的瞬间闭合，可引起高达几千个大气压的压力，同时局部温度可上升到千度高温，这一现象称为空化现象。他可造成植物细胞壁及整个生物体的瞬间破裂，使溶液能渗透到

38、药材的细胞中，从而加速药材中有效成分溶解于溶媒。根据这种作用机制可将超声波应用于提取。因超声波提取不会改变有效成分的结构，同时缩短了提取时间，提高了提取率，从而为重要成分的提取提供了一种快速、高产的提取新方法。五、 溶剂提取法的溶剂 中草药成分在溶剂中的溶解度与溶剂的性质直接相关。溶剂提取法的关键是选择适当的溶剂。溶剂选择适当，就可以比较顺利地将需要的成分提取出来。溶剂的选择要注意以下三点：溶剂对有效成分溶解度大，对杂质溶解度小；溶剂不能与中药的成分起化学变化；溶剂要经济、易得、使用安全等。选用什么样的溶剂提取中药成分，取决于溶剂的性质和被提取成分的化学结构及溶解性。溶剂可分为水及酸水或碱水。

39、亲水性有机溶剂、亲脂性有机溶剂。（一） 水水是强极性溶剂，在中草药有效成分的提取操作过程中较常。当提取中草药中亲水性的成分，如无机盐、糖类、多糖类、氨基酸等可以用水作溶剂。当某些成分显弱酸（有机酸、黄酮、蒽醌、内酯、香豆素以及酚类）或弱碱性（生物碱）时为增加其溶解度可采用酸水及碱水作为提取溶剂。但中药成分中含有粘性成分时，在进行水提取时提取液很难过滤。当用沸水做提取溶剂时，不宜将含有较多淀粉成分的中药磨成细粉后煎煮，因为淀粉会糊化。（二） 亲水性有机溶剂亲水性有机溶剂是指能与水能混溶的有机溶剂，例如乙醇、甲醇、丙酮等，以乙醇最常用。本次提取实验就是应用乙醇提取紫苏子中黄酮、多酚类等成分。乙醇对

40、于中草药的溶解性能比较好，用乙醇进行提取可使溶剂很快渗入到植物的细胞中，提取时间较短。亲水性的成分除蛋白质、粘液质、果胶、淀粉和部分多糖等外，大多能在乙醇中溶解。难溶于水的亲脂性成分，在乙醇中的溶解度也较大。还可以根据被提取物质的性质，采用不同浓度的乙醇进行提取。用乙醇提取比用水量较少，提取时间短，溶解出的水溶性杂质也少。乙醇为有机溶剂，虽易燃，但毒性小，价格便宜，来源方便，有一定设备即可回收反复使用，而且乙醇的提取液不易发霉变质。由于这些原因，用乙醇提取的方法是历来最常用的方法之一。甲醇的性质和乙醇相似，沸点较低（64），但有毒性，使用时应注意。（三） 亲脂性有机溶剂亲脂性有机溶剂是指能溶解

41、脂溶性成分的有机溶剂。常用的溶剂为石油醚、苯、氯仿、乙醚等有机溶剂。实验中就是采用石油醚提取紫苏子中的脂肪油。这些溶剂的选择性能强，对脂溶性成分一般具有较高的溶解度，对亲水性杂质的溶解度较小。在提取过程中，加入溶剂后，溶剂渗入植物细胞的时间较长，往往需要长时间反复提取才能提取完全。此类溶剂多易挥发且易燃（氯仿除外），一般有毒，价格较贵，设备要求较高。如果药材中含有较多的水分，用这类溶剂就很难浸出其有效成分，因此，不适用于大量提取中草药。第四章 紫苏子有效成分的分离一、 柱色谱法旳一般技术（一） 色谱柱色谱柱通常是玻璃管或有机玻璃管。实验室中所用的玻璃色谱柱有两种形式：一是下部带有聚四氟乙烯活塞

42、的玻璃管，此管优点是可以不涂真空油脂，从而防止污染产品。另一种下端拉细兵套有一段弹性良好的管子的玻璃管。由于前者方便且无污染，所以经常使用。经操作得出经验长柱的分辨率较好，大量物质使用粗柱较适宜。（二） 色谱材料的准备不同的柱色谱法选择不同的色谱材料，且色谱材料在使用前都需做一些平衡处理。例如，离子交换法的色谱材料离子交换树脂在使用前应用酸碱处理来得到所需的电离形势；凝胶柱色谱法的色谱材料凝胶须经溶胀后才可使用。在用溶剂平衡时，先使材料沉淀，用倾泻法除去悬浮的细颗粒，否则由于细颗粒的堵塞，溶剂的流速将显著降低。（三） 装柱将出口关闭，先在柱中加入13体积的溶剂，并且“死体积”不能有气泡。再沿玻

43、璃柱慢慢地向溶剂中加浆状物，同样注意不能有气泡。装柱时最好一次装完，这样可避免分层。（四） 加样将样品溶解在溶剂中进行透析，是样品溶液浓度较高，这样所成的峰形会较尖锐。然后开始上样。将样品溶液慢慢加入到已装好柱的玻璃柱内物质的表面，然后使液面保持一定的高度，进行洗脱操作。（五） 洗脱根据被分离物的性质选取适当的溶剂将其有效成分从分离柱上洗脱下来。实际操作过程中不同的分离方法，溶剂的洗脱原理也不同，分为吸附、离子交换、分配、体积排阻等原理。分别根据被分离物质与吸附剂的吸附差异、在两相中的分配系数、与固定相的离子交换能力、分子在固定相空穴中体积排阻作用差异而实现组分分离。实际洗脱操作过程中最常采用

44、的是洗脱法。洗脱法分为分布洗脱和梯度洗脱。分布洗脱是在一个组分被洗脱后可以更换洗脱液。梯度洗脱是逐渐改变溶剂的性质，形成一个离子强度、pH或极性的递增梯度从而使各组分依次被洗脱。实验过程常采用梯度洗脱。二、 硅胶柱色谱法（一） 原理硅胶柱色谱法是以硅胶为吸附剂进行的吸附色谱分离方法，其分离原理是根据物质分子与硅胶表面分子上的吸附力不同而得到分离。硅胶属于极性吸附剂对极性物质具有较强的吸附力，因此极性强的物质将优先被吸附。溶剂的极性应先小后大，所分离的物质也会从极性由小到大被依次分离出来。整个色谱过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。（二） 流动相用于洗脱被分离物质的流动相其极性应该有小到大且

45、跳跃不可太大，否则被分离的物质混合成分较多。通常极性小的物质用石油醚、乙酸乙酯、乙醚等洗脱；极性较大的物质用甲醇、乙醇或水洗脱。实践中经常采用混合溶剂，常用的混合溶剂及极性由小到大的顺序是己烷-苯、苯-乙醚、苯-乙酸乙酯、氯仿-乙醚、氯仿-乙酸乙酯、氯仿-甲醇、丙酮-水、甲醇-水。 （三） 惯用方法称取相当于样品量40-60倍的200-300目硅胶，至于烧杯中待用。向其中加入相当于硅胶一倍量的溶剂并用玻璃棒搅拌均匀。实验中根据混合溶剂选择用于搅拌用的溶剂。如果洗脱剂是石油醚-乙酸乙酯-丙酮体系，就用石油醚搅拌；如果洗脱剂是氯仿-醇体系，就用氯仿搅拌。如果含水量较多就不能搅拌成浆，此时应先用硫酸

46、钠久置干燥。然后开始进行装柱操作，装柱时柱底应用棉花塞紧，向其中加入填充剂。待沉淀完成后加入更多的填充剂直至流速恒定。使柱压实。开始上样，可选用干法上样和湿法上样。上样后加入洗脱剂，将一团脱脂棉塞至硅胶表面，然后加入大量洗脱剂，进行梯度洗脱，收集馏分。实验过程中应注意先用TLC法选好洗脱剂，使两相邻物质的Rf值之差为0.2-0.3.柱子应平整均匀。（四） 实验操作过程取紫苏子醇提取物7g, 采用硅胶柱色谱法对其进行有效成分的分离。 硅胶柱色谱：（1） 通过薄层色谱法寻找合适的洗脱条件：经查阅文献和多次实验得到最佳的柱色谱洗脱剂：氯仿：甲醇：醋酸=18:1:2 。（2） 样品的制备：取紫苏子提取物7g，用95%乙醇溶解与8g 硅