单克隆抗体.ppt

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1、 20022002年年1212月月3030日，日，两场筹备了两场筹备了1010年的年的“太空婚礼太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞植物细胞“新人新人”黄花烟草黄花烟草和和革新一号烟草革新一号烟草叶肉细胞叶肉细胞原生质体原生质体，动物细动物细胞胞“新人新人”是小鼠是小鼠B B淋巴细胞淋巴细胞和和骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞，两批新人，两批新人同时在同时在 “产房产房”电融合仪内孕育新生命。电融合仪内孕育新生命。“太空婚礼太空婚礼”这两场这两场“太空婚礼太空婚礼”实质是哪两项细胞工程技实质是哪两项细胞工程技术术植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术动物细胞

2、融合技术1)1)2)3)4)5)植物体细胞杂交过程示意图植物体细胞杂交过程示意图动物细胞融合过程动物细胞融合过程植物细胞杂交与动物细胞融合的比较植物细胞杂交与动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交 动物细胞融合动物细胞融合原理原理融合前处融合前处理理使用的酶使用的酶诱导方法诱导方法主要用途主要用途细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞的全能性细胞的全能性细胞膜的流动性细胞膜的流动性纤维素酶、果胶酶纤维素酶、果胶酶胰蛋白酶胰蛋白酶 物理方法物理方法（离心、振荡、电激）（离心、振荡、电激）化学方法（化学方法（PEG）物理、化学方法物理、化学方法灭活的病毒灭活的病毒获得杂种植株获得

3、杂种植株制备单克隆抗体制备单克隆抗体去除细胞壁后诱导去除细胞壁后诱导原生质体融合原生质体融合使细胞分散后使细胞分散后诱导细胞融合诱导细胞融合二二.单克隆抗体单克隆抗体B B B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞效应效应效应效应B B B B淋巴淋巴淋巴淋巴细胞细胞细胞细胞记忆记忆记忆记忆B B B B淋巴淋巴淋巴淋巴细胞细胞细胞细胞分化分化分化分化能产生抗体的细胞是能产生抗体的细胞是浆细浆细胞（即效应胞（即效应B B细胞）细胞）。抗体：能够与抗原发生特抗体：能够与抗原发生特异性结合的异性结合的免疫球蛋白。免疫球蛋白。抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法抗原抗原 反复注射动物反复注射动物从动物

4、的从动物的血清血清中分离抗体中分离抗体该法制备抗体的缺点：该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度体的特异性差、灵敏度低。低。请阅读请阅读下面一下面一段资料，段资料，找出单克隆抗体的概念找出单克隆抗体的概念 人人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B B细胞细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B B细胞只细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个单一抗体，必须用单个

5、B B细胞进行无性繁殖，即克隆。细胞进行无性繁殖，即克隆。1 1、单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念单克隆单克隆抗体：抗体：单个单个B B细胞克隆产生的细胞克隆产生的化学性化学性质单一、特异性强质单一、特异性强的抗体的抗体提示提示1 1：对：对B B细胞进行细细胞进行细胞培胞培养可养可行吗？行吗？提示提示2 2：我们所学的哪种细胞是可以无限增：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？殖的？问题：问题：如如何大量生产单克隆抗体何大量生产单克隆抗体？请尝试设？请尝试设计一个方案。计一个方案。2 2、单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备提示提示3 3：怎样获得既能产生特异性抗体，又：怎样获得既能产生特异性抗体

6、，又能大量增殖的细胞？能大量增殖的细胞？一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术设计方案：设计方案：动物细胞融合技术动物细胞融合技术单克隆单克隆抗体抗体既能产生特异性抗体既能产生特异性抗体又能大量增殖的细胞又能大量增殖的细胞19751975年英国科学家年英国科学家米尔斯坦米尔斯坦和和柯勒柯勒的实验的实验 为什么给小鼠注射为什么给小鼠注射特定的特定的抗原蛋白？抗原蛋白？会有会有几种几种融合方式？融合方式？杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点特

7、点？是否所有的杂交瘤细胞都能产生是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体专一性抗体？如何大规模进行培养得到大量的如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体单克隆抗体？阅读课本阅读课本P53P53及识图及识图2-242-24，并完成以下几，并完成以下几个问题：个问题：BBBB 、B B瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 （B B、瘤）、瘤）（一选）（一选）选选择性培养基择性培养基：只有只有杂交瘤杂交瘤细胞细胞才能存才能存活活获得产生相应获得产生相应抗体的抗体的B B细胞细胞（二选）：选（二选）：选能产生所需能产生所需专专一抗体的杂交一抗体的杂交瘤细胞瘤细胞体外培养体外培养体外培养体外培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养小鼠

8、腹腔内培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞特点：特点：特点：特点：既能既能既能既能产生特异性产生特异性产生特异性产生特异性抗体，又能抗体，又能抗体，又能抗体，又能大量增殖。大量增殖。大量增殖。大量增殖。单抗制备过程分哪几步？单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？起来。顺序是？3 3、单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用诊断试剂诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：单克隆抗体最主要的优点：特异

9、性强，灵敏特异性强，灵敏度高，并能大量制备。度高，并能大量制备。“生物导弹生物导弹”单克隆抗体药单克隆抗体药物物 单抗导向，药物为弹头单抗导向，药物为弹头治疗疾病和运载药物治疗疾病和运载药物主要用于主要用于癌症治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成物，形成“生物导弹生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。准确杀伤癌变细胞。【例例1 1】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.A.经过免疫

10、的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 B.B.不经过免疫的不经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.不经过免疫的不经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞【例例2 2】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （）A.BA.B淋巴细胞淋巴细胞 B BT T淋巴细胞淋巴细胞 C C骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 D D杂交瘤细胞杂交瘤细胞AD【例例3 3】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中列实验步骤中错误错误的是（的是（）A A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B B淋淋巴细胞巴细胞B B用纤维素酶处理用纤维素酶处理B B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B B淋淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D D筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体细胞群，培养后提取单克隆抗体B