病原微生物检验基本的样本采集.doc

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1、病原微生物检验基本的样本采集目录目录2Foodspace 陈词3课堂讲述4一、样品种类4二、采样原则5三、各类样本的采集8四、论坛网友补充部分内容20五、应急演练相关资料28在线问答31结束语62Foodspace陈词食品大讲堂开课啦。本次活动我们邀请到论坛首席大弟子老师为我们主持，讲座的题目是：病原微生物检验 基本的样本采集首席大弟子目前在某 cdc 工作，多年来一直微生物检测工作，有丰富的工作经验，熟悉 实验室管理体系。希望大家多多讨论，多多提问，共同学习。本次讲座的大纲: 一、 样本的种类（一） 环境样本（二） 临床样本（三） 产品样本（四） 动物及媒介昆虫样本 二、 采样原则（一） 防

2、护原则（二） 采集原则（三） 运输原则（四） 贮存原则三、 各类样本的采集（一） 卫生指标微生物样本的采集（二） 消毒及卫生用品样本的采集（三） 环境样本的采集（四） 病原微生物样本的采集（五） 食物中毒样本的采集（六） 解剖样本的采集本次讲座从4月 12 日上午 8:00 开始，到4月 18 日晚上结束。 欢迎大家积极参与！欢迎首席大弟子老师！课堂讲述大家好，俺因为举人不贤，举荐的贤能推三阻四的，到现在都不肯上得大讲堂来开 课。Space 妹子说只能是俺负荆开罪，由俺自己顶上。想想本人才疏学浅，不知和大家 说些什么好。想到这几天单位在学卫生部教材，发现就这个病原微生物检验的样本采集 是食品论

3、坛各位童鞋可能不太清楚的，就把整篇搬上来了，如有讲错的，请大家指出， 并一起讨论，哈哈，不过呢，我想请我的同行和大家一起来，我们大家一起讨论学习提 高吧。我想，在我这次牵头的这次讲堂上，到时由我选出一至几位优秀参与者，我代表 自己表示一下我的感谢。我这次向大家介绍的这些内容，是由卫生部疾病预防控制中心选编的微生物检验 培训教学大纲系列微生物学检验概论中的一节，样本采集。尽管这很基础， 但很关键。在微生物检验中，正确地采集、处理与运送样本是检验成功的关键。样本采 集与处理的规范化是准确、及时地提供微生物污染或感染信息的基础。样本采集或处理 失当，检测结果将无意义，甚至导致错误的结果，会带给大家误

4、导及延误一些突发事件 的处理。因此，微生物检验的标准化首先应从样本采集与处理的规范化开始，科学合理 地采集、运送、保存样本是得到可靠检验结果的前提。一、 样品种类病原微生物检验样本种类繁多，根据来源不同，可分为以下几类：（一） 环境样本 包括水、土壤、空气及物品等，可用检测环境被微生物污染的状况，并对其进行卫 生学评价；也可作为食源性疾病、突发公共卫生事件的原因样本。（二） 临床样本 包括各种体液样本、呼吸道样本、消化道样本、皮肤样本，以及尸解或活检的各种 组织器官样本等，可用于传染病病因检测，也可用于食源性疾病、突发性公共卫生 事件原因的辅助诊断。（三） 产品样本 包括食品、化妆品、涉水产品

5、、消毒及卫生用品等，主要用于卫生微生物指标检测、 卫生学评价及产品效果评价调味香精：用辛香料和肉类提取物来调配，用于方便食 品、调味料、汤料、膨化食品、小吃食品等。（四） 动物及媒介昆虫样本 包括各种宿主动物的血液样本、排泄物样本、尸解样本以及各种昆虫样本等，用于 传染病传染病追踪、传播途径的确定及自然疫源地监测。表：疫源地疾病样本来源和种类疾病宿主媒介临床样本解剖样本森林脑炎花鼠、林姬鼠蜱血、脑脊液脑流行性出血热黑线姬鼠、褐色鼠等鼠血清肺、肾登革热猴、鸟、蝙蝠伊蚊血清肝、脾、胸腺乙型脑炎猪、马、蝙蝠、鸟三带吻库蚊血液、脑脊液脑斑疹伤寒家鼠体虱、蚤血清脾、肝、肾北亚斑点热啮齿类、马、哺乳类蜱血

6、液脾、肝恙虫病啮齿类、鸟螨血液肝、肺、脾鼠疫啮齿类蚤痰、血液脾、肺、骨髓炭疽牲畜空气、水、草、食品痰、粪渗出液血、脾、肝土拉热啮齿类、羊等蜱、食品、土、水血、淋巴结语脾、肝、肺钩端螺旋体病猪、啮齿类污染物、水血、尿、脑脊液肝、肺、脑二、 采样原则（一）防护原则 采样中避免造成人员感染和样本污染非常重要。应把采集的样本视为具有感染性，需采 用必要的防护措施，注意安全操作，安全地包装和运输。应具备急救包，以便在采样中 意外泄露时使用，确保安全。1、人员要求从事高致病性病原检测样本采集的技术人员，必须经生物安全培训具备相应的实验 技能。在样本采集过程中，采样人员应按照国家相关规定的防护措施进行安全防

7、护（包 括疫苗接种等）。2、个人防护采样时要穿工作服、戴手套、口罩和帽子；接触不同患者时不能重复使用手套，以 免交叉感染；在使用或处理注射器、手术刀和其他锋利器械时，应避免割伤和造成手套 的破损；采样中尽可能穿防护服，根据所估计的疫情级别，选择不同的防护服；消毒人 员对污染区表面和溢出物进行消毒时，要穿戴防护服和厚橡胶手套；为避免吸入有高度传染力的病原，还需使用呼吸防护器面罩，护目镜等防护用品。 3、污染废弃物的处理样本采集和处理过程中产生的医疗（实验）废物应置于防渗漏的专用包装器（袋） 中；废弃的针头、玻璃试管、安瓿等利器必须放入符合要求的利器盒里，按规定进行销 毁；污染的可废弃设备和材料应

8、先消毒后废弃；污染的可再用设备或材料应先消毒后清 洗；装有废弃物的包装容器（袋）必须采用防渗漏、防遗洒的周转箱安全运送。 4、样本容器一个样本一个容器。容器要求防渗漏，最好使用符合国家规定的耐用塑料制品材料 制作，能承受运送过程中可能发生的温度和压力变化。所有采样用具、容器均需严格灭 菌，并以无菌操作采集样本，严格避免由于采样用具、容器均需严格灭菌，并以无菌操 作采集样本，严格避免由于采样对检品所造成的新污染。样本运输过程中要求采取“A 类”或“B 类”3 层包装系统，由内到外分别为主容器（样本盛装容器）、辅助容器（或 称 2 级容器）和外包装（或称 3 级容器）。样本在设施内（单位内部）传递

9、应当使用盒子等 2 级容器。 5、意外事件报告与处理样本采集和处理过程中发生意外事件或事故应妥善处理，并按国家和/或地方规定 的时限和程序及时报告，必要时采取有效措施预防和控制感染。高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本在运输、储存中被盗、被抢、丢失、泄漏时，当事人或发现者应当采 取必要的控制措施，并在 2h 内分别向相关单位及其主管部门报告。（二）采集原则 1、必要的沟通由于不同实验室的检验程序、检测项目和检测方法都不尽相同，对样本种类及采集、 运送要求也不完全一致。因此采样之前需要提前与专业实验室联系。 2、专业指导与支持专业实验室在同意检测并落实好样本运送日期和时间后，要尽快制定具体的实验

10、方 案，提供必要的指导，提供器材和采样指南（根据样本类型），最好派出专业人员在现 场进行采样指导。3、现场采样对于常规监测、诊断和突发事件应急处理，无论检测方法多么复杂，实验结果只与 采集的样本质量有关。因此现场流行病工作者在遇到可能是病原微生物引起的急性事件 时，应遵守下列 3 条采样原则。 1）即使没有理想的采样器材，也要尽快地获得生物样本（人体血液、尿液及其他临床样本）。 2）有效控制外界污染和干扰，必要时对采样器材可能存在的外来污染或干扰进行评估（随机挑选 12 个器皿，将其密封并随同样本一起保存和送检）；当采集 2 个以上样本时应采取措施防止交叉污染。 3）尽快并妥善保存（保温、冷藏

11、或冷冻）样本，以防止病原微生物玖死亡或降解。4、采样时间用于分离培养微生物的样本，应尽可能在急性期和使用抗生素之前采集。若已使用 抗生素，则需加入药物拮抗剂，如加入青霉素酶拮抗青霉素，氨苯甲酸拮抗磺胺等。用 于微生物抗体检测的血液样本，应采集急性期和恢复期 2 份样本。对不同的疾病需要采 集的样本种类、检测目的、采样时间及采样要求也不尽一致，需依据所检测微生物确定。 用于病毒分离和病毒抗原检测的样本，应在发病初期和急性期采样，病毒分类样本最好 在发病 12 天采取。5、特殊样本采样要求 因棉拭子和木质拭子棒类材料中含有核酸扩增抑制剂，因此，采集用于检测核酸的样本，如采集咽拭子或肛拭子等时，不能

12、使用这类材料，而应使用灭菌人造纤维拭子和 塑料棒。（三）运输原则 1、了解最新运送要求近年来，针对病原微生物菌（毒）种、样本的运输，国务院、卫生部以及各地方政 府出台了一系列管理条例、管理规定和管理方法。因此，运送前应了解和查阅相关要求， 或与专业实验室联系寻找相应的技术支持。2、运送基本要求 在病原微生物样本运送过程中，应严防剧烈振动和日光直射，使其处于完全封闭状态（既可防止样本蒸发，气体交换和异物污染，又能保护工作人员和环境安全）。若专 业实验室距离较远，或距样本检测的时间较长，建议样本采集后做适当预处理再运送。 3、运送生物安全要求依据国际国内通用生物安全操作规程或相关规定如病原微生物实

13、验室生物安全管 理条例、可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定、疑似 人感染高致病性禽流感/不明原因肺炎病例样本送检、接收、检测和结果报告反馈工作 流程（中疾控发2005526 号）等的相关内容执行。4、样本标识采集和运送样本的容器须有明确且牢固粘贴的标签，标明样本的种类、原始采样容 器、样本性质、数量、运送人和接受人及其联系方式、包装日期、运输日期、统一的识 别编号及病人姓名、检验目的、临床诊断等相关信息，以供检验者参考。在疾病暴发调 查中，每个患者应使用惟一的统一编号，并能与个案调查的信息符合。接收样本的实验 室也应记录接收日期和时间、接受样本者的姓名、样本性质和状态等

14、。当样本无标示或 信息不全或不符合要求时，检验人员有权向送样者索取，或有权拒绝接收样本。 5、运送温度与时间在运送过程中，时间越短、温度越低，样本到达进的质量越好。因此，应综合考虑 运送样本的时间长短、样本所处的贮存状态及运送方式等，选择运送的温度。注意全血/血细胞的样本不可冷冻运输。（四）贮存原则 1、基本要求为防止蒸发和保证安全，样本应盛装在带螺旋盖的封闭容器中置冰箱内贮存，应根 据样本的检验目的，进行适当的贮存。2、严格管理对样本贮存应严格管理，作好样本进出和储存的记录。对高致病性病原微生物菌（毒）种和样本应当设专库或者专柜单独储存，并制定严格的安全保管制度，建立档案 并指定专人负责。三

15、、 各类样本的采集（一）卫生指标微生物样本的采集 1、卫生指标微生物样本采集的一般注意事项1）代表性：采样量、采样部位应依据检样归属类别的标准要求执行，注意采用随机抽 样法，并按批号抽样。2）均匀性：固体粉末样品应边取边混合；液体样品应振荡混匀；涂抹取样的棉拭子应 将棉拭子尾部剪断，投入稀释液内充分振荡后，作为原液检样。3）及时性：为避免样品变质和样品中微生物的增殖或死亡，原则上送检时间越快越好， 一般应于 4 小时内检验。对不能及时送检或检验的样品，食品和水样一般要求要低 温条件下保存；药品和化妆品仅要求放在室温阴凉干燥处，不必冷藏或冷冻，以免 引起产品质量变化。4）完整性：样品在检验前应保

16、持原包装状态，不能开启，液体样品要保证包装完好， 防止运输中外溢或泄露。已开启包装的样品不能作为检品，若发现包装有破裂、霉 变、变色及异味等情况，不得再检验。应尽量采集有包装的食品，如袋装、瓶装或 罐装食品。若包装太大或没有包装，则应使用采样工具采集于无菌容器内送检。2、食品样本的采集和送检1）采集方法和数量：参见 GB/T4789.12008食品卫生微生物学检验 总则有关规定 执行。2）注意事项：样本应在冷冻条件下送检。将样本保存在内有干冰的泡沫塑料隔热 箱内送检，可维持温度在 0以下；样本送到实验室后应立即登记，填写实验序号， 将不同样本分置于室温、冰箱或冷冻室中，按要求检验；一般阳性样本

17、在发出报 告后 3 天（特殊情况可适当处长）方能处理，进口食品的阳性样本需保存 6 个月，才可处理。 3、化妆品样本的采集及送检1）采样数量：一般视每批化妆品品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位，每批样 品应从 2 个以上大包装中随机抽取 4 瓶（盒）包装单位送检。检验时，应分别从 2 个包装单位以上的样品中共取 10g 或 10ml；包装量小于 20g 的 样品，采样量可适当增加。2）供检样品的处理：依据国家标准，按不同样本的性状进行处理。3）注意事项：化妆品中多加有防腐剂或抑菌剂，可使样本中各种待检目标菌处于抑 制状态而不易检出，检验时常采用中和法（中和剂为吐温80 和卵磷脂）去除防腐

18、剂和抑菌剂，以使目标菌得以复苏；若一个样本同时需要做多种分析，如细菌、 毒理、化学等，应首先取出部分样品作细菌检验，剩余样本做其他分析。4、生活饮用水样本的采集及送检 样本的代表性是保证生活饮用水样本检验质量的关 键，从性质均匀的河水及湖水中容易采集到具有代表性的样本，但许多水体随时间 和空间会发生很大变化，要采集具有代表性的样本难度较大，必须制定出合理的采 样规则，采水量应为瓶容量的 80%，以便在检验时充分混匀。1）采样点的选择：生活饮用水的采样点应设在水处理前的汲水处及处理后的出厂水的 出水处；在采集管网系统水样前，须放水充分冲洗管道，以保证样品具有代表性， 同时应注意被冲洗管道的直径及

19、水的流速等。 河水：采样点的水体应是充分混合的。但受到流速、湍流等影响，以及支流进入后 横向扩散迟缓，特别当主流和支流存在温差等情况下，河水很难混合均匀，采样时 要特别注意。应根据河流大小按表 1 和表 2 要求采样。表 1 河流不同深度的采样点（垂直）水深（m）采样点数说明51（距水面 0.5m）水深不足 1M 时,在 1/2 水深 处5102（距水面 0.5m，河底以上0.5m 处）河流封冻时，在冰下 0.5m 处103（水面下 0.5m，1/2 深处， 河底以上 0.5m）若有充分数据证明垂线上水 质均匀，可减少采样点数表 2不同规模河流的采样点（断面）年平均流量（m3/s）分类名称采样

20、点数1000大河至少 6 个点，按流量增大而适当增加注：应离岸边一定距离，在河底上采样时不要搅动底层 湖水：湖水水质因时空而变化的因素与河水不同，推荐在入口、出口及湖水中心采样。按照湖水深度在垂直方向参考河水的要求采样。 地下水：根据水质与地质结构关系设置采样点，可利用现有水井，或根据与地下水相联系的征候，在井水的涌水点采样。采集井水时，可先用泵充分抽水，以保 证样本能真正代表地下水源的实况。自来水：水样中含有物质因时间的不同有差异，如夜间可能析出管道附着物质，早 晨取样，悬浮物等含量较高。采集自来水样时，先用酒精灯将水龙头烧灼消毒， 然后将龙头打开，放水 510min，再采集水样。2）采样方

21、法 手工采样：将采样瓶用铁架固定，塞住瓶口，待瓶沉入到一定深度时拉开瓶塞，让水样 进入。 自动采样器的采样：自动采样器可在一定间隔时间或连续采集样本，分别放放样品瓶或 合并于一个样品瓶中成为混合样。 对容器的要求：容器及瓶塞、瓶盖应能耐受灭菌温度和压力，且在此温度压力下不释放 和产生任何能抑制生物活性或导致其死亡或促进其生长的化学物质。玻璃或聚丙烯塑料 容器用自来水和洗涤剂洗涤后，用自来水彻底冲洗，用硝酸溶液（1+1）浸泡，再用自 来水洗，最后用蒸馏水洗净。为了除去余氯，在灭菌前应向容器内加入硫代硫酸钠以还 原余氯，用 125ml 水样加 0.1ml 硫代硫酸钠溶液（100g/L）。容器可用压

22、力蒸馏或干热 灭菌。5、一次性使用卫生用品样本的采集及送检1）样本采集量：为保证所采样本的代表性和检验质量，样本量应足够。一般应于同 一 批号 3 个运输包装中至少随机抽取 15 个最小包装量；每 5 个为 1 组，其中 5 个样品 留样，5 个样品作各项微生物指标测定，5 个样品准备复测。2）样本送检及保存：注意送检及时性，如不能及时检验，样本应于阴凉、干燥处室温 下保存。（二）消毒及卫生用品样本的采集 除注意采样的代表性、均匀性、及时性和完整性外，所采的消毒样本，还必须考虑使用合适的中和剂。1、 医疗卫生机构消毒及卫生用品样本的采集及送检1）物体表面消毒采样：使用 5cm5cm 灭菌规格板

23、在消毒处理后 4 小时之内采样。若被 采表面积30cm2，设 4 角及中央 5 点。若用平板沉降法采样，将灭菌培养基平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露 15 分钟，立 即盖好平皿送检。亦可使用各类自动化采样器采样送检。2、医疗卫生人员手及皮肤黏膜消毒样本的采集及送检1）手的采样：一般在接触患者或健康检查者、从事医疗卫生活动前采样。受检者五指 并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子在双手指屈面由指根到指端往复 涂擦 2 次，边擦边转动棉拭子。剪去采样后棉拭子的操作者手操作触及部位，棉拭 子头部放入 10ml 含相应无菌中和剂的试管中，立即送检。2）皮肤黏膜采样：以 5cm5cm 灭菌规格板放在

24、被检处，用浸有含相应中和剂的无菌洗 脱液的棉拭子 1 支，在规格板内横竖往返均匀涂擦 5 次，边涂擦边转动棉拭子，采 毕剪去棉拭子的操作者手操作触及部位，棉拭子头部放入含有 10ml 相应无菌中和剂 的试管中，立即送检。对于不规则的黏膜皮肤可用棉拭子按上述基本要求采样送检。3、医疗用品样本的采集与送检 可用破坏性方法进行样品检验者，如一次性使用的无菌输、注器具均参照中华人民共和国药典2005 年版二部附录中无菌检查法之规定执行。对不能以破坏性方法 进行样品检验者，可用浸有无菌生理盐水的棉拭子在被检物品表面涂擦采样，若可采表 面积100cm2，应采取全部表面；若可采表面积100cm2，则采 10

25、0cm2。 4、使用中消毒剂与无菌器械保存液样本的采集与送检严格执行无菌操作，用无菌吸 管吸取 1ml 被检样液，加入 9ml 中和剂中混合均匀，立即送检。（三）环境样本的采集1、空气样本的采集与送检常用的空气微生物检验采样方法有 2 种：平板沉降法和采 样器采集法。1）采样器分类：按照采样方式不同，空气微生物采样器可分为两类，1 类是将微生物直 接采到固体培养基上（如 Andersen 采样器），2 类是先把微生物采到液体或其他介质 上，再转种到培养基或细胞上显示（如 Porton 采样器）。根据所检微生物的性质选 择采样器。按流量分类：按流量不同，采样器可分为大、中、小 3 类：3 位数以

26、上为大流量（500L/min），2 位数为中流量（49911L/min），1 位数为小流量（10L/min）。 按介质性质分类：根据采样器所用介质可分为固体采样器和液体采样器。 按工作原理分类：采样器的工作原理可分为 6 种：撞击式、沉降式、过滤式、静电 吸附式、旋风式和离心式采样器。2）采样介质：采样介质对微生物具有支撑、黏附、保护和生物作用。常用有凡士林、 聚硅酮、氧化烯二十二烷酮、培养基和 SGB（糖、甘油、牛血清白蛋白）。3)空气采样方法及送检 a.平板沉降法采样时间：根据需要，采样可选在消毒前、后或在工作中，也可在有人或无人的场所。 采样分布：根据房间面积确定采样布点，室内面积30c

27、m2 者，设 4 角及中央 5 点，距墙壁 1m，距地面 高 1.5m 处。 采样方法：将琼脂平板置于各采样点，打开平皿盖，扣放于平皿旁，暴露规定时间，立即盖好送检。 b.空气采样器采样采样器选择：采集细菌类大小的活粒子，选用 RCS、LWC-I、Andersen 采样器，采病 毒选用 LVS 采样器。小体积的采样器，以裂隙式、Andersen 及撞击式最常用。高湿 度时禁用静电采样器；野外不能用大动力的采样器；医院应选用噪声低的采样器；清 洁环境应选用过滤式采样器。 采样方法：一般室内空气采样可按平板沉降法分布。洁净或生物安全环境采样布点 可参考如下表：表洁净室施工及验收的必要测点数风面积（

28、单流 向）或室面积（乱流）（m3）洁净度100 级1000 级10000 级100000 级10232221043222086224016134280322582100403210320080632064001601264013根据浮菌多少应当采集的最小样本量见下表： 表 浮游菌最小采样量浮游菌上限（cfu/L）计算最小采样量（L）100.350.6130.560.1300.05600.013000.0056000.0013000注意事项:应特别注意采样器撞击距离、物理参数、粒子大小范围、气溶胶浓度、风向、 风速、采样因子的生物学特性及采样器的效率和适应范围等。2、水样本的采样与送检 采水点应

29、选择稻田、塘水、疫区井水和邻近畜舍、厕所积水点，最好是非日光直射处的表层水。采样量由工作条件絮凝或离心浓缩处理时，以每个采样点取 100200ml 为宜。3、土壤样本的采集与送检 鼠疫和炭疽疫源地的洞穴和草场可被病死的鼠、畜污染。洞穴挖开时见有鼠骸时取土 1020g，草场根据调查的线索多选几个点，每点采土 1020g，加 23 倍水充分振 荡，待自然沉淀后，取上清液检验。（四）病原微生物样本的采集 传染病实验室诊断、传染源调查、自然疫源地监测、流行病学调查研究，都以检出特定的病原微生物或其相关物质为目的。这类样本来源主要是人和宿主动物、媒介昆虫， 也包括水、土壤、食品等样本供调查传染源。1、病

30、原微生物样本采集的一般注意事项1）针对性：不要求样品代表性，强调针对性，尽可能采集病原微生物含量最多的部 位。2）足量：应采用足够检测用的样本，否则可能会得到假阴性结果。3）多样性：应采集各种可能作为污染源的食物和环境样本，以及各种可能含有病原 体的临床样本。4）及时性：取样后应尽快测定，以利于疾病控制和患者的治疗。2、样本保存、包装、运送1）保存：为分离样本中病原细菌或病毒，应根据样本运送时间的长短及不同病原微生物对干燥、温度、营养、pH 值的耐受能力，选择合适的培养基和推荐保存温度。 分离培养细菌的样本：在运送培养基中运送并保存于合适的温度，确保目标细菌的 存活并抑制其他微生物的过度生长。

31、除脑脊液、尿液和唾液，其他样本若不能在 24 小时内处理，多数可存放在室温；若长期保存，除一些低温敏感细节处，应存放在 48条件下。 分离病毒的样本：一般应放在保温容器（04）里，不可放置超过 2 天，尽早送 到实验室进行病毒分离。如无条件立即运送或不能立即分离病毒时，应将样本冻存 保存。若长期储存，最好置-70冻存。 检测抗原或抗体的样本：检测抗体的血清可在 4条件下保存约 1 周，最长 10 天，超过 1 周必须在-20条件下冷冻。注意避免不必要的反复冻融。运送过程中若无设 备保证血清的冷冻状态，最好不要冷冻血清。在室温存放血清虽不理想，但仍可用 于检测抗体，甚至是存放数周的血清。不要仅因

32、为没有冷冻设备而将已采集的血清 轻易弃去。保证样品运送温度的方法：为维持 48，运送盒中围绕第 2 层容器至少要填充 4 个冰袋，可维持冷藏 23 天。为保证-20条件，在外包装袋内用 2kg 干冰，但需确 保二氧化碳能释放以防爆炸，这样可维持样本冷冻 12 天，为保证-70条件，可采 用液氮来储存和运送。2）包装：根据国际空运和健康相关条例，任何感染性材料的包装和运输都必须遵循 WHO 对传染性物质和诊断性样本的安全运送指南（WHO，1997）。标准的包装方法和材料 应能确保即使在运送中包装意外受损时，也能保护人员安全及样本完整。运送样本 时最安全的方式是用由 3 个包装对包装物进行 3 层

33、包装。如要空运，一个完整包装 的整个外部尺寸不能小于 10cm，每个包装样本中，样本量不超过 4kg 或 4L（每个原 始容器最大 500ml）。每个包装样本中所含的感染物不应超过 50g 或 50ml。运输样本 的外包装必须有明确的标签，标明寄送人和接收人的详细联系方式，包装日期和运 输日期等。附带的文件包含样本详细资料（材料种类、性质、数量和日期），相应的 生物危害标签及所需的保存温度3）运送：地面运送样本时，注意将装有样本的箱子紧紧固定在交通工具上，车上还应 备有吸水材料、消毒剂、手套、口罩、护目镜、密封防水的废弃物容器等防护用品。 为避免路途颠簸引起样本溶血，可在运送前分离血清。在国际

34、、国家和商业有关规 定允许下，诊断样本也可空运，但应注意规范包装。 分离培养细菌、病毒的样本大多数要求冷藏运送，不耐寒冷的脑膜炎奈瑟菌等应在 3537运送。粪便样本因含杂菌较多，常加入甘油缓冲盐水保存液，但甘油缓冲盐 水不能用于弯曲菌和弧菌。 用于细菌、病毒或寄生虫分离的血液样本需低温保存，不能冷冻，用冰块而不是干 冰运送。检测立克次氏体类微生物的全血样本要求干冰保存和冷冻运送。检测核酸的样品运送要求低温快速。从样本采集到检测的间隔时间要尽可能短，并尽可能将 样本处于冷藏状态。检测前保存时间较长时则需冷冻样本以防核酸降解。3、临床样本采集1）粪便样本 采集：在急性腹泻期及用药前，采集自然排出的

35、新鲜粪便。黏液脓血便挑取黏液或脓血部分 35g；液状粪便采取水样便或含絮状物的液状粪便 25ml；成型粪 便至少取蚕豆大小粪块一块（约 5g）。采集的样本盛于含保存液或增菌液的灭菌 容器内送检。若无法获得粪便，可用保存液或增菌液湿润过的棉拭子插入肛门 45cm 深处（小儿 23cm）轻轻转动一圈，擦取直肠表面黏液后取出，盛入运送 培养基或保存液中送检。注意为保证多个检验项目的开展，同一病人应至少采 集 2 支肛拭子。注意事项：勿将尿液或水混入粪便或容器内；任何容器均应用橡皮塞塞紧或螺旋 盖旋紧（此处请注意，这与我们平时说的培养时的盖子需透气不一样）； 容器外面切勿沾染粪便；注意贴好标签；所采取

36、的粪便样本应尽快送检， 运送时间不得超过 2 小时，否则应保存在 48条件下送检；集体腹泻 或食源性暴发患者粪便样本采集的数量应根据患者人数决定。2）咽拭子、洗漱液或痰液样本 a.咽拭子的采集：患者仰头张口，用压舌板压舌，将无菌棉拭子伸入口腔涂抹咽部数次后，放入 2mlHanks 液试管中。注意：将接触手的棉拭子部分及时用 无菌镊子折断去掉，管子用橡皮塞盖紧或旋紧。b.洗漱液的采集：用生理盐水或自配淡盐水 15ml 作为洗漱液。先让病人咳嗽，以洗漱 液反复洗漱咽部 1min，直接将洗漱液吐入试管内。c.痰液的采集 常规痰液：痰液样本的采集以清晨为佳，因晨痰量较多且病原体含量也高。患者晨起后用清

37、水充分漱口数次，以减少口腔正常菌群的污染，然后用力自气管深 部咳出痰液，吐至无菌容器内，并尽量防止唾液及鼻咽部分泌物混入，加 盖、标识、塑料袋密封、冷藏条件下送检。气管洗涤液：取 89 号消毒导管，从鼻腔插入气管内，缓慢注入灭菌蒸馏水 5ml，取 出导管，留取患者 3 小时内咳出的痰液，放入无菌容器内加盖，此法宜 在清晨空腹时进行。d.注意事项：采取样本的时间一般在发病第 1 天，最迟不超过 3 天，最好选择体温在 38以上时采集。肺部感染应采痰样本，以清晨第 1 口痰为最佳。 3）脑脊液（CSF）样本一般于出现神经症状时采集，查 IgM 只需一份脑脊液，查 IgG 则需收集 2 次，分别 于

38、发病初期和恢复期采集。CSF 样本最好在医院由有经验的医生腰椎穿刺采集，采集量要求至少 1ml，尽可能采集 35ml，采集后分别注入 34 支带螺旋帽的无菌试管中，1ml/ 管，原则上第 1 管用于细菌学检测（作厌氧培养时，样本应注入厌氧瓶内），第 2 管送 疾病预防控制中心专业实验室复核或做其他微生物检测，第 3、4 管分别用于临床生化 及常规检测。用于细菌培养的样本应立即送检，运送大多不需要运送培养基且不能冷冻。 因脑膜炎奈瑟菌离体后迅速自溶，容易死亡，最好作床边接种。用于病毒培养时也无须 运送培养基，样本在 48条件下最多可维持 48 小时，更长时间需在-78保存。 4）血液样本 a.物

39、品准备：备齐碘伏、压脉带、无菌棉签、棉球、真空采血针与持针器（或注射器）等，根据检验项目备齐各种采血管。 b.采样步骤及注意事项确定静脉：正中静脉粗大浅表，对受检者造成的痛苦最小，是最常选用的静脉采血部 位，也可选用其他部位的静脉；用食指或中指触摸感觉静脉位置决定穿刺 点。消毒穿刺点：用碘伏拭子以静脉穿刺点为中心向外环状擦拭，范围直径至少 10cm，风 干过程防止接触此处皮肤，否则需要重新消毒；若采集培养样本，还需 消毒采血管和培养瓶穿刺部位。穿刺操作：让受检者上身与地面垂直，肘部置稳固台面或床面枕垫上，使上臂与前臂 呈直线，手掌略低于肘部，充分暴露静脉穿刺点；拧松并轻轻除掉针头上 的硬质封套

40、，一只手握住胳膊并绷紧皮肤，另一只手拇指和食指持带针持 针器或注射器与上臂成 15 度角，迅速穿刺进针，感觉针头前端阻力突然 消失并有突破落空感时停止。观察回血：进针后一只手固定持针器，另一只手将真空采血管标签向下置入持针器中 并推至顶端，使双向针后端针头穿透采血管胶塞，并立即观察回血；若未 见回血，则将其视为带负压注射器，在皮下移动寻找静脉；一旦针头进入 静脉，即可见回血，此时应嘱受者松拳并松开压脉带，使采血管底部低于 采血针前端。采集足量样本：单手继续固定持针器，管内真空缓慢柔和地将血样本吸入采血管直至 真空耗尽，血流停止。更换采血器：待血管内血流完全停止后，单手严格固定持针器，另一只手拔

41、出采血管 并立即轻轻颠倒混匀 58 次；若需采集多管血样本，可再向持针器内插 入另一支采血管，然后重复相应步骤。c.血液样本采集与处理：作血液病原培养时，严格用无菌穿刺法采静脉血，成人采血 1015ml，儿童 25ml，婴儿 0.52ml。所采血液移入无菌有螺口、加入抗凝剂的容器 或培养瓶中送检。作病原培养的血液样本在环境温度下大多可存放 24 小时，如时间 更长则需在 48下保存或运送。作抗体检测时，用于检测 IgM 的血清一般采于发病 1 个月内；用于检测 IgG 的血清应 收集 2 次，第 1 次于发病初期（13 天），越早越好，第 2 次一般在恢复期（第 1 次 采血后 34 周）。检

42、测双份血清抗体滴度，有 4 倍以上升高时有诊断意义。用于微量 法检查抗体的样本，可用三棱针刺手指或耳垂部，再用毛细管采集，一般不少于 0.3ml。 采集血清样本可将 10ml 静脉血移入无抗凝剂的无菌螺口管，室温静置 30min 使之凝 集，然后置冰盒中 48条件下至少 12 小时（在此温度下可保存 4872 小时）。血 清样本可在实验室低速离心（1000g10min）以弃残存血细胞。如能立即检测，采集 的血液应在室温下 24 小时内尽快分离血清；如果 24 小时内不能送达实验室，应在运 送前尽可能分离血清。血清在 48条件下最多保存 10 天。如果长期不检测，应冷 冻血清。若现场不能分离血清

43、，血样本应在 48条件下保存，未分离的血样本不能 冷冻保存。 作血片、暗视野检查可采耳垂血或指血。当怀疑为真菌感染时，应采集双份量，分别 作双相培养。5）尿液样本：一般应采集晨起第一次尿液送检；原则上应在使用抗菌药前采样。一般 采集中段尿，体检和门诊患者多自取。住院病人需作病原检查时，成年女性以肥皂 水洗外阴，再以灭菌水或 0.1%高锰酸钾溶液冲洗尿道口，然后排去前段尿 10ml 左右 于无菌容器内，立即送检；男性先用肥皂水清洗尿道口，用清水冲洗后，采集中段 尿送检。对昏迷或尿潴留患者可通过导尿术留取样本；当怀疑菌尿来自肾盂时，可 用导尿管采集左右两侧肾盂尿（此法一般请泌尿科医生协助采集），左

44、右侧样本应标 记明确，避免错误。用导尿管采尿一般为 1015ml，若为长期留置尿管者，应更换新 尿管留取样本。样本最好在 23 小时内送到实验室检测，否则也不要冷冻，可在 48 条件下保存运送样品，低温可抑制污染菌的过度生长，维持病毒的稳定。6）皮肤样本 大多数皮肤病的诊断主要依据体格检查和临床病史，不需要采集样本。在诊断不明 确、表现异常等少数情况下，需要采集皮疹或皮肤病变样本。出现囊疱疹或脓疱疹 时，可直接从囊泡或脓泡采集液体用于镜检，或选择典型或透明清亮的新鲜疱疹， 用无菌生理盐水棉签清洁表面两次并蘸干皮肤后，用无菌针尖刺破皮肤疱疹，用无 菌棉签挤出并蘸取疱疹液立即置于盛有细胞维持液的塑

45、料离心管中，旋紧螺盖，用 于培养。再次用生理盐水或消毒酒精擦拭进针部位，无菌干棉签按压少顷，防止感 染。怀疑皮肤炭疽或淋巴腺鼠疫时可从病变皮肤（焦痂和腹股沟淋巴结）取样做细 菌学培养。7）其他临床样本 a.生殖器器官样本外阴部样本：采用无菌棉拭子直接擦拭男性或女性外阴部溃疡面采分泌物，放入采样 液中，旋紧盖子，标记后塑料袋密封，立即低温运送至实验室。阴道、尿道、前列腺和子宫分泌样本 女性患者用肥皂及 0.1%高锰酸钾溶液冲洗外 阴和尿道口；男性患者用 2%红汞或 0.1%苯扎溴铵消毒尿道口后，用无菌纱布或无菌 干棉球拭干，再以无菌操作方式采取腔道内病变部位样本。b.穿刺液样本 包括胆汁、胸水、

46、腹水、心包液、关节液和鞘膜液等，原则上需请临 床医师在使用药物前以无菌穿刺术抽取；胸水和腹水抽取量均为 510ml，心包液和关 节液等为 15ml；样本抽取后立即以无菌操作法注入含抗凝剂的无菌试管中，充分混 合后立即送检。c.角膜拭子样本 用湿润的无菌棉签在眼角膜下部轻轻擦拭 23 次，采集分泌物，置 保存液中混匀，标识后冷藏送检，或低温保存。4、动物宿主样本采集1）家畜样本采集：参照临床样本和解剖样本采集2）野生大动物和鸟类样本采集：按检验需要抽心血、取脏器和采集体处寄生虫，分别 送检。3）啮齿类动物样本采集：鼠间鼠疫流行的疫源地按鼠疫耶尔森菌的方法采集。疫源监 控按鼠密度调查方法捕捉。在寄居洞口和鼠行路或人行小路两侧，间隔 25m 放笼， 傍晚放，清早收，捕获笼用布袋套装送检验室，检菌前鉴定鼠种，寄生蚤并作记录。4）昆虫及节肢动物样本采集：应采集