【重医】临床检验基础.docx
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1、血液(一)1.采血的方法及质量保证1.采血方法有哪些?如何操作?3.如何保证采血质量?4.真空采血管有哪些种类?5.多管采血时真空采血管的采血顺序?1.血液标本采集方法有哪些?各有什么利弊?操作时应注意些什么?1.皮肤采血法部位:左手中指或无名指指端内侧(WHO推荐)婴幼儿、严重烧伤者操作:穿刺深度约23mm,忌用力挤压,动作要迅速2 静脉采血法采血部位:肘静脉、颈外静脉。止血带不超过1分钟,以免瘀血和血液浓缩。1)注射器法切忌将气泡推入血管;应拔下针头,再将血液注入试管2)真空采血器法(负压采血法)试管塞勿松动;针外乳胶套勿取下;标有不同的色码,适于不同的检验项目;采血管混匀:58次;采血后
2、多管血液分配顺序:2.常用添加剂的原理及应用2.常用抗凝剂的种类、原理及适用范围?2.何谓抗凝剂?常用抗凝剂有哪些?3.EDTA、枸橼酸钠草酸钠肝素的原理及主要用途?*能阻止血液凝固的化学试剂称为抗凝剂(anticoagulant)3.血涂片的制备方法薄血膜法:血细胞形态(手工、仪器);厚血膜法:疟原虫等6.血涂片的质量标准是什么?厚薄适宜,头、体、尾分明,分布均匀,两端和两侧留有空隙。(血膜至少长25mm,两侧空隙至少5mm)4.瑞氏染色的原理和影响因素7.瑞氏染色的原理?染色不佳的原因及处理。5.为什么瑞氏染色血片上可以*看到不同的色彩?构成这些色彩的物质是什么?细胞着色原理:化学亲合、物
3、理吸附嗜酸性物质:碱性物质与酸性伊红结合染成红色。Hb、嗜酸性颗粒嗜碱性物质:酸性物质与碱性美蓝结合染成蓝色。中性物质:与伊红美蓝均可结合,淡紫红色。细胞核:强碱性核蛋白(如组蛋白)与伊红结合,酸性DNA与碱性亚甲蓝结合,紫红色影响因素:1)瑞氏染液质量 2)pH对细胞染色的影响 3)染色时机 4)染液用量 5)染色时间 6)冲洗 7)脱色与复染:过深,可甲醇脱色、水浸泡;过浅,可复染( 先加缓冲液后染液)4.pH对细胞染色有哪些影响?*环境pH偏酸染色偏红;pH偏碱染色偏蓝因此,选用清洁中性的玻片、优质甲醇、缓冲液(pH6.4-6.8)血液(二)1.HICN测定的原理及注意事项。6.HiCN
4、测定原理及注意事项?*7.SDS测定原理及注意事项 ?10.血红蛋白测定大致分为哪几类?ICSH推荐哪种方法?为什么要推荐此法?95.血红蛋白测定的方法有哪些?各有何优缺点?HICN波峰540nm评价:(1)ICSH和WHO推荐的参考方法。操作简便;结果稳定可靠;可测多种Hb(除SHb外);可直接定值。(2)致命弱点:剧毒(3)不能测SHb,对HbCO转化慢。(4)脂血、高球蛋白、高白细胞、血小板增多可致Hb假性增高。SDS原理:Hb(除SHb外)+ SDS SDSHb(棕红色)SDS-Hb:波峰538nm,波谷500nm评价:突出优点:试剂无毒,常用方法(临床首选)未定需依赖HiCN法间接得
5、出结果(不能直接计算,需制备标准曲线)SDS会破坏WBC,不能用于WBC计数!2.RBC、Hb测定的临床意义。8.红细胞生理性,病理性增多的原因常见有哪些?9.红细胞病理性减少的主要原因?举例说明。RBC:(1)生理性减少6个月-2岁婴幼儿(造血原料不足)妊娠中、晚期(血液稀释)老年人(造血功能减退)(2)生理性增多新生儿、高原生活、剧烈运动(缺氧);成年男性比女性高(男性雄性激素水平较高)(1)病理性减少:贫血(anemia)病因分类: RBC生成减少:骨髓造血功能低下(再障、白血病、恶性肿瘤骨髓转移等);造血原料缺乏或利用障碍:如缺铁性贫血、巨幼贫。红细胞破坏增加:各种溶血性贫血红细胞丢失
6、过多:急、慢性失血(2)病理性增多相对性增多:血液浓缩所致。如剧烈呕吐、严重腹泻、大面积烧伤的患者。绝对性增多:慢性心肺疾病、真红,RBC可达(710)1012/LHb:基本同红细胞,但Hb判断贫血比RBC好。各种贫血时,红细胞和Hb减少程度可不一致。根据Hb,贫血分级:轻度12091 g/L;中度 9061 g/L;重度6031 g/L;极度 3%常伴有WBC减少,造血功能衰退表现。主要见于巨幼贫、恶性贫血。(二)中性粒细胞的毒性变化 中毒指数:含中毒颗粒的细胞在中性粒细胞中所占的比值。毒性指数愈大,中毒情况愈重。(1)大小不均(anisocytosis)(2)中毒颗粒(toxic gran
7、ulations)(3)空泡(vacuoles)(4)杜勒体(Dhle bodies)(5)退行性变(degeneration )(三)中性粒细胞的其他异常形态(1)棒状小体(auer bodies):急性白血病(粒、单可见,淋巴无)(2)巨多核中性粒细胞:核超过5叶,巨幼贫(3)双核中性粒细胞:2个核,MDS、粒细胞白血病、巨幼贫(4)环形杆状核中性粒细胞:核呈环形,MDS、粒细胞白血病、巨幼贫(5)与遗传有关的中性粒细胞异常:Chediak-Higashi畸形、Alder-Reilly畸形May-Hegglin 畸形、Pelger-Huet 畸形(四)淋巴细胞的形态异常(1)异型淋巴细胞:
8、在某些病毒性感染或过敏原刺激下使淋巴细胞增生,并出现一定的形态变化称为异型淋巴细胞。Downey按形态特征将其分为以下三型:型(空泡型)、型(不规则型)、型(幼稚型)。一般病毒感染异淋10%(2)具有卫星核的淋巴细胞:淋巴细胞主核旁另有一游离小核。血液(五)1.血细胞分析仪的检测原理。2.血细胞分析仪参数的检测原理及意义。(一)细胞计数原理(RBC、WBC、PLT)1、电阻抗 2、激光散射法 3、二者联用(二)白细胞分类原理三分群(电阻抗法);五分类(多项技术联合检测)(三)血红蛋白检测原理:溶血Hb Hb衍生物(波长530550nm)(四)网织红细胞计数原理1.VCS原理:新亚甲蓝染色着色R
9、NA,Hb溢出(影细胞)2.流式细胞技术(FCM)原理:网织红细胞RNA与吖啶橙、哌若宁-Y等染料结合,同时测前向散射光(体积)、荧光强度(RNA)得到二维散点图。血细胞分析仪的检测参数1.RDW(红细胞体积分布宽度):反映外周血红细胞体积大小异质性的参数,用红细胞体积的变异系数来表示。RDW-CV:体积分布曲线上1SD的分布宽度与MCV的比值。RDW-SD灵敏,反映大、小、网织红细胞存在RDW-SD:红细胞分布的峰值相当于100%时的20%界限的分布宽度,以fl表示。不受MCV的影响。RDW-CV更好反映总体变化意义:用于贫血的形态学分类(RDW/MCV)诊断缺铁贫。95%以上缺铁贫RDW异
10、常。小细胞低色素贫血、RDW正常则缺铁贫可能不大。缺铁贫与轻型地贫的鉴别。均是小细胞低色素,但前者RDW升高,后者正常。3.血液分析仪性能评价。26.血细胞分析仪性能评价常选用哪些指标?如何评价?*1)空白检出限(limit of blank, LoB):本底2)精密度:分批内、批间及总精密度。标本老化3)准确性:与真值一致性。参考方法(校准品测)4)携带污染率(carryover): (l1-l3)/(h3-l3)100%5)分析测量区间(analytical measuring interval, AMI):稀释效果,线性范围6)可比性:与常规方法测定结果比较7)对异常标本和干扰物的灵敏度
11、8)参考区间的制定9)白细胞分类:重复性、准确性 (与人工分类比3较8 )28.影响白细胞、血小板直方图异常的主要原因有哪些?WBC:M、E、B及幼稚细胞PLT:左移,PLT小;右移,PLT大;出现双峰:电磁波干扰或可能是小RBC或其碎片干扰。29.哪些情况下可见红细胞直方图是“双形”?为什么?*左移:小细胞;右移:大细胞;基底变宽:细胞大小不均;双峰:铁粒幼、缺铁治疗后31.哪些病理因素对血细胞分析仪测定有影响?高球蛋白血症、血栓性疾病存在冷纤维蛋白使血中非晶体物聚集,致使WBC、PLT;低色素性贫血、某些肝病等病人的RBC溶血不全而影响Hb的测定、WBC;高脂血症致Hb ;有核红细胞、WB
12、C过高的影响等血栓与出血1. BT、APTT、PT的概念。30.APTT测定有何临床意义?*32.PT测定有何临床意义?33.何为INR?测定INR有何临床意义?出血时间测定(BT):将皮肤刺破后,血液自然流出到自然停止所需的时间。活化部分凝血活酶时间测定(APTT):在受检血浆中加入接触因子激活剂(如白陶土)和部分凝血活酶(如脑磷脂),在Ca2+的参与下,观察血浆所凝固的时间,是内源性凝血系统常用的筛选试验。意义:1目前推荐应用的内凝的筛选试验。2. APTT延长、和减低,能检出:C小于25的轻型血友病。、V、X严重缺乏,如肝病,维生素K缺乏。抗凝物质:口服抗凝剂、血循环中存在病理性抗凝物质
13、等。纤溶活性增强。3APTT缩短高凝状态,如DIC的高凝期 血栓性疾病,如心、脑血管病变,深静脉血栓等。4监测肝素治疗的首选指标以维持结果为基础值的1.53.0倍左右为宜。质控: 标本:抗凝剂、试管要求同前,立即送检,避免阳光直射。务必去除血小板(3000rpm,10min分离血浆,PPP) 温度:(371)C 时间:采血后2h以内测定。 试剂:白陶土质量不一,制活能力不同,血浆凝血酶原时间(PT):在受检血浆中加入过量的组织凝血活酶和Ca2+,观测血浆的凝固时间,即为血浆凝血酶原时间。PT的长短反映了血浆中凝血酶原、纤维蛋白原和因子、的水平,是外源性凝血系统常用的筛选试验。意义:1PT延长先
14、天性凝血因子I、缺乏获得性凝血因子缺乏,如严重肝病、维生素K缺乏、纤溶亢进、DIC晚期血中抗凝物质增加,口服抗凝剂、肝素等。2PT缩短DIC早期,心肌梗死、脑血栓形成。3国际标准化比值(INR)是用于监测口服抗凝药的首选指标,预防深静脉血栓:以INR为1.52.5为宜;治疗静脉血栓、肺栓塞:2.03.0;动脉栓塞、心瓣膜置换:3.04.54凝血酶原活动度(prothrombin activity, PTA):相当于正常人的百分率,评估肝脏受损程度PTA高低与肝损程度成反比。40%是诊断重型肝炎的重要依据,亦是判断重型肝炎预后的敏感指标。质控:基本同APTT测定。试剂:组织凝血活酶试剂质量批间差
15、异大,可比性差。4. 血小板计数的方法有哪些?手工法和仪器法检测血小板各需要注意些问题?方法:1显微镜计数法直接计数法:稀释、破坏RBC、充池、计数。根据稀释液不同分为:(1)草酸铵溶血直接计数法 优点:对RBC破坏力强,PLT形态清楚,国内推荐方法。;缺点:受操作者水平的影响。(2)复方尿素溶血直接计数法(许汝和法) 优点:血小板胀大易辩认;缺点:有时RBC破坏不完全;尿素不易保存。2血液分析仪法优点:可同时测PLT的多个指标,快速,适于临床。缺点:计数误差大3.流式细胞仪法(国际推荐参考方法)血小板膜上特有抗原:CD42a或CD61a,用荧光标记的单抗。质控:1.器材 标准化、清洁干燥。2
16、. 采血顺利3.计数时间 充池后15min再计数,采血后1h内计数完毕。4. 计数光线适中,注意与杂质鉴别。5.重复计数 同一份标本2次计数,相差10%,否则需再次计数6. 血涂片观察:PLT60109/L时,应观察血涂片意义:1. 生理变化:早晨较低,午后较高;剧烈运动后较高;月经、妊娠有改变;静脉血比毛细血管血高2病理变化:血小板减少(PLT100109/L):血小板生成障碍:再障、放射性损伤、急性白血病血小板破坏或消耗增多:ITP、DIC血小板分布异常:如脾肿大、血液被稀释血小板增多(PLT400109/L):原发性增多:慢粒、真红。反应性增多:急性化脓性感染、急性大出血等。5. D-D
17、测定的原理是什么?有什么临床意义?D-D是交联纤维蛋白的降解产物,继发性纤溶特有。免疫学方法检测意义:1排除血栓形成:阴性可排除2. 增高:继发性纤溶。血栓性疾病、肿瘤。原发性与继发性纤溶的鉴别3. 溶栓治疗的监测D-D显著升高。34.BT测定方法有哪些?分别加以评价。*1.出血时间测定器法(TBT)评价:伤口长度和深度固定,结果准确、敏感、重复性好,BT测定首选的方法。但病人不易接受。高度怀疑血管因素异常时才做。2.Ivy法评价:长度和深度难于控制,可靠性较差,已淘汰。尿液(一)1.尿液的生成与哪些因素有关,肾小球滤过膜屏障的组成2.尿液标本分为几种,各自优缺点46.餐后尿适合作那些检查?为
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