食品中菌落总数的测定方法.doc

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1、食品微生物学检验菌落总数测定1范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。本标准适于食品中菌落总数的测定方法。2术语和定义菌落总数：指食品检样经过处理，在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等),所得1mL(g)检样中所含菌落的总数3设备和材料恒温培养箱：361 301；冰箱：25；恒温水浴：461；天平：感量为0.1g；均质器；震荡器；无菌吸管1mL、10mL或微量移液器及吸头；无菌锥形瓶：250 mL；500 mL；无菌培养皿：直径90mm；pH计或pH比色管或精密pH试纸；放大镜、菌落计数器4培养基和试剂4.1平板计数琼脂培养基4.1.1成分胰蛋白胨5.0g酵母浸膏

2、2.5g葡萄糖1.0g琼脂15.0g蒸馏水1000mLpH7.00.24.1.2制法将上述成分加入到蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管和锥形瓶，121高压灭菌15min。4.2磷酸盐缓冲液4.2.1成分磷酸二氢钾KH2PO434.0g蒸馏水500mLpH7.24.2.2制法贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121高压灭菌15min。4.3无菌生理盐水4.3.1成分氯化钠8.5g蒸馏水1000mL4.

3、3.2称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121高压灭菌15min。5检验程序菌落总数的检验程序如下：检样25g（或25mL）样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释选择23个适宜样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养皿内每皿中加入15 20mL平板计数琼脂培养基，混匀培养36148 h2 h计算各平板菌落数计算菌落总数报告6操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8 000r/min10 000r/min 均质1 min2 min ，或放人盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍

4、打1 min2 min ，制成1：10 的样品匀液。6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1 ：10 的样品匀液。6.1.3 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1： 10 样品匀液1 mL ，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100 的样品匀液。6.1.4 按3.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用一次1 mL无菌吸管或吸头。6.1.5

5、根据对样品污染状况的估计，选择2 个3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）, 在进行10 倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1 mL 样品匀液加人两个无菌平皿内。同时分别取1 mL 稀释液加人两个无菌平皿作空白对照。6.1.6 及时将15 mL20 mL 冷却至46 的平板计数琼脂培养基（可放置于46 1 恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。6.2 培养6.2.1 琼脂凝固后，将平板翻转，36 1 培养48h2h 。水产品30 1 培养72h3h.6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL ) ，

6、凝固后翻转平板，按6.2.1 条件进行培养。6.3 菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony - forming units , CFU ）表示。6.3.1 选取菌落数在30 CFU300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于300 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。6.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半

7、个平板后乘以2 ，代表一个平板菌落数。6.3.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。7 结果与报告7.1 菌落总数的计算方法7.1.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）中菌落总数结果。7.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式（l ）计算：N=C/（n1+0.1n2）d（1 ) 式中：N 样品中菌落数；C 平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；nl 第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2 第二稀释度（低稀释倍数）平板个数；d 稀释因子（第一

8、稀释度）。7.1.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 ，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。7.1.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30 ，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。7.1.5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍数计算。7.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30300 之间，其中一部分小于30 或大于300 时，则以最接近30 或300 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。7.2 菌落总数的报告7.2.1 菌落数在100 以内时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。7.2.2 菌落数大于或等于100 时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。7.2.3 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。7.2.4 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。7.2.5 称重取样以CFU/g 为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。